上海起發(fā)為PROGEN的中國(guó)代理商，PROGEN公司成立于1983年，總部位于德國(guó)海德堡，由海德堡大學(xué)教授聯(lián)合創(chuàng)辦，是德國(guó)一家生物公司，也是德國(guó)癌癥研究中心的合作伙伴。

PROGEN 主要產(chǎn)品線：

體外診斷領(lǐng)域中細(xì)胞生物學(xué)和生物醫(yī)院學(xué)實(shí)驗(yàn)所需要的科研試劑盒抗體。

核心產(chǎn)品主要為：K19抗體的衍生類(lèi)產(chǎn)品和細(xì)胞膠蛋白類(lèi)抗體等。

品牌：PROGEN

貨號(hào)：PRAAV9

上海起發(fā)現(xiàn)貨PROGEN PRAAV9說(shuō)明書(shū)

AAV9 Titration ELISA

*的微量滴定板酶免疫測(cè)定法，用于定量檢測(cè)完整的AAV9 wt病毒體，AAV9重組病毒體或人腺相關(guān)病毒9的已裝配和未裝配的空衣殼。捕獲抗體檢測(cè)到未裝配的衣殼蛋白上不存在的構(gòu)象表位。 

貨號(hào)： PRAAV9 
數(shù)量：  96次

腺相關(guān)病毒（AAV）是非致病性的ssDNA病毒，作為基因治療的病毒載體，正在被廣泛研究。該病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)多種分裂和非分裂細(xì)胞，顯示長(zhǎng)期基因表達(dá)，細(xì)胞免疫應(yīng)答低。AAV已用于多項(xiàng)臨床試驗(yàn)（例如FIX，CFTR，帕金森氏病，Canavan病）中，顯示沒(méi)有嚴(yán)重的與載體相關(guān)的不良反應(yīng)。AAV9對(duì)于CNS中的應(yīng)用特別有用。 

目前用于表征AAV制劑的方法包括滴定ELISA，實(shí)時(shí)PCR，DNA點(diǎn)印跡，轉(zhuǎn)導(dǎo)單位測(cè)定，感染中心測(cè)定，SDS-PAGE或電子顯微鏡。

AAV制劑所含的空衣殼比填充的，具有治療活性的病毒顆粒多10倍。由于完整顆粒和空顆粒均可誘導(dǎo)免疫反應(yīng)，因此對(duì)于體內(nèi)應(yīng)用而言，確定完整的顆粒滴度至關(guān)重要。

通過(guò)PROGEN的AAV9滴定ELISA進(jìn)行免疫定量分析提供了一種快速，靈敏且可重現(xiàn)的方法，用于滴定完整的AAV9 wt病毒體，AAV9重組病毒體或已組裝且完整的空AAV9衣殼。

ELISA原理：

該測(cè)定基于夾心ELISA技術(shù)，其中將對(duì)組裝的AAV衣殼上的構(gòu)象表位具有特異性的單克隆抗體（mab）涂在板上，并用于從樣品中捕獲AAV顆粒。

捕獲的AAV顆粒的檢測(cè)過(guò)程分為兩個(gè)步驟。

1. 生物素偶聯(lián)的單克隆抗體與捕獲的AAV顆粒結(jié)合。
2. 鏈霉親和素過(guò)氧化物酶偶聯(lián)物與生物素分子反應(yīng)。底物的添加導(dǎo)致顯色反應(yīng)，其與特異性結(jié)合的病毒顆粒的量成比例。

AAV定量方法的比較：

每種常用的量化方法各有利弊：

• qPCR已被廣泛使用，但存在一些問(wèn)題，例如樣品制備，引物設(shè)計(jì)或PCR效率，這些問(wèn)題可能導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)室間結(jié)果之間的高度差異。
• 數(shù)字液滴PCR方法克服了qPCR的某些局限性。但是，由于不同的樣品處理方案，實(shí)驗(yàn)室之間仍然可能發(fā)生變化。
• 如果使用可靠的參考材料，則斑點(diǎn)印跡是一種簡(jiǎn)單且定量的方法。然而，它通常受蛋白質(zhì)印跡的線性和動(dòng)態(tài)范圍的限制。

考慮到上述技術(shù)的實(shí)際缺陷，目前常規(guī)的夾心ELISA在實(shí)驗(yàn)室間和實(shí)驗(yàn)室間的變異以及易于使用方面似乎是*的。因此，它代表了可靠和可再現(xiàn)的總rAVV衣殼滴度定量的宜格式。

改組/變異的AAV的使用：

改組/突變的AAV載體的識(shí)別取決于受改組/突變影響的特定衣殼區(qū)域。用于PROGEN的AAV ELISA的捕獲抗體結(jié)合特異性的（在某些情況下還定義為良好的構(gòu)象表位）。這些表位是由相應(yīng)的AAV血清型的衣殼組件產(chǎn)生的。ELISA可能識(shí)別您的改組/突變的AAV載體的跡象是抗體結(jié)合表位的存在。然而，衣殼蛋白的蛋白質(zhì)序列的變化也可能影響蛋白質(zhì)的構(gòu)象，因此，AAV衣殼上呈現(xiàn)的表位的構(gòu)象。這可能會(huì)影響抗體的結(jié)合親和力，并影響基于AAV ELISA試劑盒提供的（非改組）試劑盒對(duì)照的效價(jià)測(cè)定。由于這些屬性在很大程度上取決于所執(zhí)行的特定改組/突變，因此PROGEN無(wú)法保證對(duì)改組/突變的AAV向量進(jìn)行成功且的定量。即使改組/突變的AAV衣殼上仍存在抗體結(jié)合表位，也需要針對(duì)您的特定AAV載體測(cè)試和優(yōu)化您的檢測(cè)方法。

PROGEN強(qiáng)烈建議您生產(chǎn)和校準(zhǔn)合適的（改組/突變）試劑盒對(duì)照品，以確保使用PROGEN ELISA試劑盒可靠地確定滴定的AAV載體的滴度。

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